题型:填空题 题类:常考题 难易度:普通
实验目的:比较三种微生物所产生的纤维素酶的活性.
实验原理:纤维素酶催化纤维素分解为葡萄糖,用葡萄糖的产生速率表示酶活性大小;用显色反应表示葡萄糖的生成量.
实验材料:三种微生物(A~C)培养物的纤维素酶提取液,提取液中酶蛋白浓度相同.
实验步骤:
(1)取四支试管,分别编号.
(2)在下表各列的一个适当位置,填写相应试剂的体积量,并按表内要求完成相关操作.
管号 试剂(mL) | 1 | 2 | 3 | 4 |
蒸馏水 | 1.4 | 1.4 | 1.4 | 1.5 |
pH7.5的缓冲液 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
纤维素悬浮液 | 0.3 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
微生物A提取液 | 0.1 | |||
微生物B提取液 | 0.1 | |||
微生物C提取液 | 0.1 | |||
总体积 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
(3)将上述四支试管放入37℃的水浴中,保温1小时.
(4)在上述四支试管中分别加入 试剂,摇匀后,进行 处理.
(5)观察比较实验组的三支试管与对照组试管的颜色及其深浅.
实验结果:
微生物A提取物 | 微生物B提取物 | 微生物C提取物 | |
颜色深浅程度 | + | +++ | ++ |
分析讨论:
(1)该实验中的对照组是 号试管.
(2)实验组试管均呈现的颜色是 ,但深浅不同.
(3)上述结果表明:不同来源的纤维素酶,虽然酶蛋白浓度相同,但活性不同.若不考虑酶的最适pH和最适温度的差异,其可能原因是 .
(4)你认为上述三种微生物中,最具有应用开发价值的是 .
主要试剂及仪器:麦芽糖标准液、5%淀粉溶液、斐林试剂、蒸馏水、恒温水浴锅等.
实验步骤:
步骤一:制作麦芽糖梯度液.取7支干净的具塞刻度试管,编号,按表加入试剂,再将试管置于60℃水浴中加热2min,取出后按试管号顺序排列.
试剂 | 试管号 | ||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | |
麦芽糖标准液(mL) | 0 | 0.2 | 0.6 | 1.0 | 1.4 | 1.6 | 2.0 |
蒸馏水(mL) | 2.0 | 1.8 | 1.4 | 1.0 | X | Y | Z |
斐林试剂(mL) | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
步骤二:萌发3天的小麦种子制备淀粉酶溶液.
步骤三:将装有淀粉酶溶液的试管置于70℃水浴中15min,取出后迅速冷却.
步 骤四:另取四支试管,编号A、B、C、D,向A、B试管中各加5mL5%淀粉溶液,向C、D试管中分别加入2mL已经处理的酶溶液(忽略其中含有的少量麦 芽糖)和蒸馏水,将四支试管置于40℃恒温水浴中保温10min,然后将C、D试管中的溶液分别加入到A、B试管中,摇匀后继续在40℃恒温水浴中保温 10min.
步骤五:取A、B试管中反应溶液各2mL分别加入E、F试管,然后向E、F试管分别加入 , , 观察颜色变化.
结果分析:将E试管中颜色与步骤一中获得的麦芽糖标准液进行比较,获得该试管中麦芽糖浓度,并计算出α﹣淀粉酶催化效率.
请分析回答:
表1
操作步骤 | 操作方法 | 试管A | 试管B | 试管C |
1 | 加淀粉溶液 | 2mL | 2mL | 2mL |
2 | 加淀粉酶溶液 | 1mL | 1mL | 1mL |
3 | 温度处理 | 60℃ | 100℃ | O℃ |
4 | 加碘液 | 2滴 | 2滴 | 2滴 |
试题篮