- 二一组卷

题型：综合题题类：难易度：困难

浙江省宁波市镇海区镇海中学2023-2024学年高二下学期期末考试生物试卷

高等植物中的乙烯生物合成受到发育阶段和环境的共同调节，其中乙烯合成酶在这一过程中起到至关重要的作用。拟南芥乙烯合成酶相关基因主要有两种：AtACS4和AtACSS为研究以上基因表达水平与发育阶段的关系，科学家将AtACS4和AtACS5的基因分别和GUS报告基因融合，并转入拟南芥。图1为使用的载体图谱，kan'为卡那霉素抗性基因，Amp'为氨苄青霉素抗性基因。据此回答下列问题：

	幼嫩根	幼嫩叶	成熟根	成熟叶
AtACS₄		艹	++	++++
AtACS₅	+	++++	++	++

注：+越多，表示GUS基因产物经染色后颜色越深

（1）、目的基因的克隆：根据AtACS4和AtACS5序列信息，设计引物对目的基因PCR扩增，对扩增产物进行电泳。制备凝胶时选择合适的梳子来制备样品孔，插入齿梳的时间应在琼脂糖凝固(“前”或“后”)。电泳过程中，凝胶点样孔端应靠近电泳槽极接口，电泳完成后切胶回收DNA，测序验证。

（2）、构建重组DNA分子：测序后可知所得条带确为实验所需条带且无突变。为使目的基因正确插入载体相应位置，设计引物时，在目的基因两端分别引入两种限制酶的识别序列。用酶处理PCR所得的DNA片段与空载体(未插入目的基因的载体)，可获得重组DNA 分子。

（3）、将重组DNA 导入农杆菌：用氯化钙处理后的农杆菌，发生了变化，成为感受态细胞。低温下将农杆菌与重组DNA混匀，使外源DNA粘附与受体细胞表面，最后短暂热刺激，使外源 DNA 进入受体细胞。将受体菌接种在(“含”或“不含”)抗生素的培养液中，慢速培养一段时间，使细胞恢复回正常状态，并表达相关基因。两小时后，再将农杆菌溶液涂布于添加了的LB平板进行筛选。

（4）、农杆菌转化拟南芥：将转基因农杆菌与消毒处理拟南芥叶片共同培养，共同培养后的拟南芥叶片转入含氨苄青霉素的固体培养基，进行多次培养，主要目的是除去农杆菌和筛选转化的植物细胞。若培养基中氨苄青霉素浓度太低，可能会出现较多假阳性植株，因此在转基因前需要对受体进行检测。经过发芽和生根培养后的组培苗，在移栽大田前需进行炼苗，炼苗的作用是。

（5）、拟南芥乙烯合成酶的表达特点：使用GUS染液染色后，具GUS基因表达产物的部位会现蓝色，用肉眼可看到，且一定程度下染色深浅可反映出GUS基因的表达水平。使用GUS染液对不同发育阶段的两种转基因拟南芥进行染色。AtACS₄和AtACS₅的启动子和GUS报告基因融合后进行转化、染色后获得的实验结果如上表，可以推测启动子在幼嫩植铢的叶片中表达量更高，AtACS₄在根中的表达情况是。

举一反三

要从土壤中将分解纤维素的细菌分离出来，应该将它们接种在（）

下列说法正确的是(　　)

下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，有关说法错误的是（）

“不务正业”的化学诺奖又颁给了生物学，2018年10月3日，诺贝尔化学奖授予了格雷格•温特（Gregory P.Winter）等3位科学家，以表彰他们在酶的定向进化，肽类和噬菌体展示技术等方面的成绩。噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时，外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。

请根据材料回答下列问题：

植物学家在培育抗虫棉时，对目的基因作了适当的修饰，使得目的基因在棉花植株的整个生长发育期都表达，以防止害虫侵害。这种对目的基因所作的修饰发生在（）

回答下列（1）、（2）小题：

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