研究人员从市售酸奶中分离出一种叫嗜热链球菌(St)的细菌,为了便于培养和纯化,首先制备甲酚绿(BCG)牛乳培养基:将脱脂乳粉100g加入500mL蒸馏水中,再加入1.6%的BCG乙醇溶液(一种指示剂)1mL,高压蒸汽灭菌(80—90℃)20min,即得溶液A.将酵母膏10g,琼脂20g,蒸馏水500mL,分别配制成pH为5.5和7.0溶液,121℃高压蒸汽灭菌20min,即得溶液B.以无菌操作将A、B两溶液等体积混合均匀,倒于平板,待冷凝后置于37℃恒温培养箱倒置培养24h,若无杂菌生长,即可使用。然后通过平板划线法进行培养和纯化。根据以上材料回答问题:
(3)、常用的灭菌方法除了材料中提到的高压蒸汽灭菌外,还有
、。
(4)、下列示意图中正确的操作顺序为
。
(5)、每次划线前灼烧接种环是为了,在第二次以及其后的划线操作时,总是从开始划线,原因是。