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题型:综合题 题类:模拟题 难易度:普通

广东省惠州市2019年高三生物高考一模试卷

科研人员培育了一种能够降解餐厨废弃物并生成乳酸的转基因毕赤酵母。基本思路是在乳酸脱氢酶基因(LDH)的单基因表达载体中逐个接入糖化酶基因(Ga)表达盒与α-淀粉酶基因(Amy)表达盒,构建出AGL-三基因表达载体,如图1所示:(ori为复制原点;Zeocin R为博来霉素抗性基因;)LDH-单基因表达载体①②GL-二基因表达载体AGL-三基因表达载体oriZeocin RLDHAmyGaBglⅡBamHⅠA.糖化酶基因表达盒BglⅡBamHⅠB.α-淀粉酶基因表达盒BglⅡBamHⅠ③C④D.基因重组毕赤酵母E.表达检测。

(1)、获取目的基因:利用PCR技术获得目的基因的过程中,需要在PCR反应体系中加入模板、Taq酶及
(2)、将图1所示结构“导入”毕赤酵母后,要筛选出含有三基因表达载体的毕赤酵母的操作思路是:
(3)、对筛选出的菌株进行进一步鉴定的方法有:(写出一种)。利用转基因毕赤酵母降解餐厨废弃物生成乳酸,既减少了环境污染,也降低了乳酸的生产成本,这符合生态工程中的原理。
(4)、构建三基因表达载体的难点在于构建目的基因的表达盒,图2LDH-单基因表达载体①②GL-二基因表达载体AGL-三基因表达载体oriZeocin RLDHAmyGaBglⅡBamHⅠA.糖化酶基因表达盒BglⅡBamHⅠB.α-淀粉酶基因表达盒BglⅡBamHⅠ③C④D.基因重组毕赤酵母E.表达检测为构建α-淀粉酶基因表达盒的示意图(糖化酶基因表达盒构建与之类似,此处省略)。

注:pro为启动子;AOX TT为终止子;Bsp119Ⅰ、XbaⅠ、Bgl II、BamHⅠ为四种限制酶)LDH-单基因表达载体①②GL-二基因表达载体AGL-三基因表达载体oriZeocin RLDHAmyGaBglⅡBamHⅠA.糖化酶基因表达盒BglⅡBamHⅠB.α-淀粉酶基因表达盒BglⅡBamHⅠ③C④D.基因重组毕赤酵母E.表达检测

操作➀的处理是:将质粒1与α-淀粉酶基因均用Bsp119Ⅰ与XbaⅠ两种不同的限制酶处理,然后拼接。与用一种限制酶切相比,优点是;在此之前,科研人员还利用点突变技术对α-淀粉酶基因序列进行了同义密码子替换(即不影响氨基酸序列)改造,推测其原因。操作➁中必需用酶对质粒2处理,才能获得能正常表达的α-淀粉酶基因表达盒。

举一反三
学习以下材料,回答(1)~(4)题。

筛选组织特异表达的基因

筛选组织特异表达的基因,对研究细胞分化和组织、器官的形成机制非常重要。“增强子捕获”是筛选组织特异表达基因的一种有效方法。

真核生物的基本启动子位于基因5'端附近,没有组织特异性,本身不足以启动基因表达。增强子位于基因上游或下游,与基本启动子共同组成基因表达的调控序列。基因工程所用表达载体中的启动子,实际上包含增强子和基本启动子。

很多增强子具有组织特异的活性,它们与特定蛋白结合后激活基本启动子,驱动相应基因在特定组织中表达(图A)。基于上述调控机理,研究者构建了由基本启动子和报告基因组成的“增强子捕获载体”(图B),并转入受精卵。捕获载体会随机插入基因组中,如果插入位点附近存在有活性的增强子,则会激活报告基因的表达(图C)。

获得了一系列分别在不同组织中特异表达报告基因的个体后,研究者提取每个个体的基因组DNA,通过PCR扩增含有捕获载体序列的DNA片段。对PCR产物进行测序后,与相应的基因组序列比对,即可确定载体的插入位点,进而鉴定出相应的基因。

研究者利用各种遗传学手段,对筛选得到的基因进行突变、干扰或过表达,检测个体表型的改变,研究其在细胞分化和个体发育中的作用,从而揭示组织和器官形成的机理。

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