【实验课题】酵母RNA的提取和鉴定

【实验目的】1．从酵母中提取RNA；2．鉴定RNA．

【实验原理】微生物是工业上大量生产RNA的原料，其中以酵母尤为理想，因为酵母核酸中主要是RNA，DNA很少，菌体易收集，RNA易分离．RNA不溶于乙醇和无水乙醚．RNA热稳定性较蛋白质强．利用稀碱法（稀碱能使细胞壁溶解）或高盐法（高浓度的盐改变细胞膜的通透性）来释放RNA．RNA水解液（加硫酸、加热）+苔黑酚﹣FeCl₃试剂加热直到沸腾1分钟，会呈现墨绿色．

【实验材料】干酵母粉、离心机、烧杯、试管、玻璃棒等；0.2%氢氧化钠、95%乙醇、无水乙醚、乙酸、10%硫酸溶液、苔黑酚﹣FeCl₃试剂等．

【实验步骤】

①称6克干酵母②加0.2%氢氧化钠45mL，沸水加热20分钟，搅拌，后加乙酸7滴③离心10分钟后取上清液④边搅拌边缓慢加95%乙醇并静置10分钟⑤离心后先用95%乙醇洗两次，再用无水乙醚洗两次⑥获得RNA粗制品⑦RNA鉴定

请根据实验方案，思考并回答下列问题：

步骤①收集藻细胞：将两种藻细胞培养液进行预处理后，离心取沉淀物。

步骤②获取叶绿体粗：提物4℃下分别破碎两种藻细胞后，再分别用差速离心法和密度梯度离心法分离获取叶绿体粗提物(原理示意图如下)。

步骤③去除杂质DNA：向步骤②的叶绿体粗提物中加入DNA酶、缓冲液，37℃静置15min后，离心取沉淀物。

步骤④粗提叶绿体DNA：向步骤③获得的叶绿体中加入缓冲液、SDS、蛋白酶K，60℃水浴2h，离心取上清液。再向上清液中加入氯仿异戊醇，在4℃下离心取　？　。

步骤⑤纯化叶绿体DNA：向粗提溶液中加入3mol·L^－1醋酸钠及预冷的95%酒精，低温静置1h后，离心弃上清液。加预冷的95%酒精、离心洗涤1～2次，取沉淀物用超纯水溶解。

步骤⑥DNA纯度和浓度：测定利用分光光度法测量并计算叶绿体DNA的纯度及浓度，结果如上下表(表中OD₂₆₀/OD₂₈₀值越接近1.8说明DNA越纯)。