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题型:综合题 题类: 难易度:普通

高考生物二轮复习专题学案:14 基因工程

促红细胞生成素(EPO)是一种能刺激骨髓造血的糖蛋白类激素。生产重组人促红细胞生成素(rhEPO)时,需构建EPO基因(E基因)表达载体(如图所示),并将E基因导入受体细胞CHO-DHFR- , 通过细胞培养生产rhEPO。回答下列问题:

(1)、从人肝细胞中提取mRNA,以mRNA为模板采用RT-PCR方法扩增获得EPO的cDNA(E基因)时所需的酶是。PCR所需的引物如下: 

引物P1、P2的作用是,通常限制酶的酶切序列设计在引物的端。

(2)、用PBT质粒和E基因构建PBT-E表达载体时所需的酶是。某同学比较PBT和PBT-E的大小后,推测E基因的碱基长度为100 bp(bp表示碱基对),该推测是否正确?请说明理由:
(3)、CHO-DHFR-为二氢叶酸还原酶缺失型细胞系细胞,只有在添加了次黄嘌呤和胸腺嘧啶的培养基上才能生长。将含有PBT-E与CHO-DHFR-细胞的培养液混合,完成转染,然后将细胞置于多孔培养板上,每个孔中最多有一个细胞,用选择培养基筛选。与正常动物细胞培养基相比,该培养基缺少的成分是。经选择培养,在多孔培养板上,有的孔中出现了由细胞分裂产生的细胞集落。为从这些细胞集落中筛选出能产生rhEPO的细胞,应怎样筛选?
(4)、工厂化生产rhEPO时,除营养条件外,还需满足的其他条件有
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