井冈霉素是我国目前防治水稻纹枯病的主导农药,由于多年的单一使用,部分地区纹枯病菌对其产生了不同程度的抗药性,迫切需要研发有类似效果的新型替代生物农药.从细菌M18中提取的申嗪霉素能有效抑制水稻纹枯菌,与其它农药相比对人体和动物安全性高.为了开发更稳定、高产的新型菌株,科研人员进行了以下研究.请回答下列问题:
(1)筛选菌株选择{#blank#}1{#/blank#} (健康/患纹枯病)的水稻植株的根切成小段放入液体培养基中培养24h后,取适量培养液涂布于琼脂平板上,培养5天后,挑选形态不同的{#blank#}2{#/blank#} , 对其进行编号.然后挑取少许菌株分别接种于长满水稻纹枯菌的琼脂平板上,培养3天后,观察纹枯菌的生长,根据{#blank#}3{#/blank#} 选出编号为P12的理想菌株.
(2)鉴定菌株P12所属的细菌类型提取P12基因组DNA,扩增其16S rDNA(能体现不同菌属之间的差异),扩增过程需要的酶有{#blank#}4{#/blank#} ,还需要特定的{#blank#}5{#/blank#} . 对其测序后确定该菌株所属细菌类型.
(3)检测P12的细胞毒性
用人肺癌细胞系A549作为指示株系,在37℃恒温培养箱中培养.通入的空气应含{#blank#}6{#/blank#} ,培养液中含少量胎牛血清,目的是{#blank#}7{#/blank#} .2h后分别将相同浓度的P12、M18和DH5α(人体肠道内共生的大肠杆菌)菌液5μL加入A549细胞培养液中,4h后测定吸光值,以表示乳酸脱氢酶(LDH)的释放量.LDH是活细胞内含有的酶,当细胞受到细菌攻击时,细胞膜的{#blank#}8{#/blank#} 改变,LDH释放至细胞外.测定结果显示,P12对A549细胞的毒性{#blank#}9{#/blank#}
(4)部分地区的纹枯菌对井冈霉素产生抗药性的原因,是由于{#blank#}10{#/blank#} 对细菌进行长期的选择,使细菌的{#blank#}11{#/blank#} 发生了改变的结果.
![](http://tikupic.21cnjy.com/f6/fb/f6fb2b48d95bf9a5f7382fcd84346d2c.png)