- 二一组卷

题型：实验探究题题类：模拟题难易度：困难

江苏省南通市2019届高三上学期生物高考一模试卷

科研人员运用两种方法分离杜氏盐藻、球等鞭金藻细胞的叶绿体，并提取叶绿体DNA，主要实验步骤和结果如下，其中SDS能瓦解生物膜，氯仿异戊醇不溶于水且密度均大于水，DNA不溶于氯仿异戊醇。请回答：

步骤①收集藻细胞：将两种藻细胞培养液进行预处理后，离心取沉淀物。

步骤②获取叶绿体粗：提物4℃下分别破碎两种藻细胞后，再分别用差速离心法和密度梯度离心法分离获取叶绿体粗提物(原理示意图如下)。

步骤③去除杂质DNA：向步骤②的叶绿体粗提物中加入DNA酶、缓冲液，37℃静置15min后，离心取沉淀物。

步骤④粗提叶绿体DNA：向步骤③获得的叶绿体中加入缓冲液、SDS、蛋白酶K，60℃水浴2h，离心取上清液。再向上清液中加入氯仿异戊醇，在4℃下离心取　？　。

步骤⑤纯化叶绿体DNA：向粗提溶液中加入3mol·L^－1醋酸钠及预冷的95%酒精，低温静置1h后，离心弃上清液。加预冷的95%酒精、离心洗涤1～2次，取沉淀物用超纯水溶解。

步骤⑥DNA纯度和浓度：测定利用分光光度法测量并计算叶绿体DNA的纯度及浓度，结果如上下表(表中OD₂₆₀/OD₂₈₀值越接近1.8说明DNA越纯)。

（1）、步骤①中预处理时应将藻液置于处24h，以降低叶绿体中淀粉粒的含量，有利于分离得到完整叶绿体。步骤②在利用差速离心法分离获得叶绿体前，需要先在(填“低于”“等于”或“高于”)4 000r·min^－1下离心去除细胞壁、核物质等。

（2）、步骤③依据的主要原理是，去除的“杂质DNA”来源于。

（3）、步骤④中离心后应取。步骤⑤中用95%的冷酒精离心洗涤过程要注意动作轻缓，其目的是。

（4）、根据实验结果分析，法较适于分离提取叶绿体DNA，原因是。

举一反三

相关试卷