①用接种针挑取（填“菌落A”或“菌落B”）接种于盛有完全液体培养基的离心管中，28℃振荡培养3～5天后，离心取沉淀物，用无菌水洗涤3次制成菌悬液。

②吸取1 mL菌悬液加入无菌培养皿中，倾注15 mL融化并冷却至50℃左右的基本培养基，待其冷凝后用记号笔在（“皿盖”或“皿底”）划分五个区域，标记A、B、C、D、E。

③在划分的五个区域上放入少量分组的氨基酸粉末（如下表所示），经培养后，观察生长圈出现的区域，从而确定属于何种氨基酸缺陷型。

在上述鉴定实验中，发现在培养基A、D区域出现生长圈，说明该氨基酸缺陷型菌株属于缺陷型。

①查找数据库发现该放线菌的16S rRNA目的基因片段及相应限制酶识别序列如下图所示：

16S rRNA基因片段

为了获得目的基因16S rRNA，需要使用的限制酶是和。得到目的基因以后就可以利用PCR技术对16S rRNA进行体外扩增，此过程需要加入催化。

②聚合酶链式反应对引物的特异性要求较高，放线菌是一类GC含量高的细菌，设定退火温度时需要适当（填“升高”或“降低”）温度，为了摸索出最适退火温度，设定了55℃、56℃、57℃、58℃四个温度梯度，反应结束后，电泳检测PCR产物（已知16S rRNA片段大小为1 500 dp），不同温度对应的结果如图所示，1～4四个泳道分别对应的退火温度是（填字母）。

A.55℃、56℃、57℃、58℃           B.56℃、55℃、58℃、57℃

C.58℃、57℃、56℃、55℃           D.55℃、58℃、56℃、57℃